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    PCR常見術(shù)語

    發(fā)布時間: 2011-05-13  點擊次數(shù): 2327次

    PCR常見術(shù)語

    1.矩陣形式代表什么?

    矩陣形式就是體外包裝的cDNA文庫以二維矩陣的形式進行排列組合,用于篩選特定的基因和片段。

    2.SM是什么意思?

    SM是“懸浮培養(yǎng)液”的縮寫。

    3.Ct 值的定義

    在熒光定量PCR技術(shù)中,有一個很重要的概念 -- Ct值。C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是:每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

    4.什么是內(nèi)參照法?

    在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。   

    5.PCR-ELISA法:利用地高辛或生物素等標記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,再加入抗地高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,zui終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
     

    6. 什么是競爭法?

    選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。   

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